制備液相流動相通過高壓泵進入系統(tǒng)，樣品溶液通過注射器進入流動相，流動相加載到色譜柱（固定相）中。由于樣品溶液中各組分在兩相中的分配系數(shù)不同，經(jīng)過兩相反復(fù)吸附－解吸分配后，各組分的運動速度有很大的不同。它被分離成一個單獨的組件，然后依次從列中流出。當(dāng)樣品濃度通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號并傳送給記錄器，數(shù)據(jù)以地圖的形式打印出來。

 

　　制備液相溶于流動相中的各組分經(jīng)過固定相時，由于與固定相發(fā)生作用（吸附、分配、排阻、親和）的大小、強弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。

 

　　液相色譜是現(xiàn)在食品實驗室中應(yīng)用非常廣泛的一款儀器，但是還有很多小伙伴對它的原理、使用維護等知識不太了解。今天小編就從HPLC概述、工作原理、結(jié)構(gòu)組成、常見故障及維護、HPLC應(yīng)用等方面來給大家科普下HPLC的基礎(chǔ)知識。

 

　　色譜圖其實簡單地講是一個橫坐標(biāo)是時間縱坐標(biāo)是電信號的二維圖譜。液相色譜法，你可以簡單地想象，固定相是一個多空海綿狀的柱形結(jié)構(gòu)，樣品在孔洞中進進出出。因為各個物質(zhì)的吸附能力不同，所以才會在色譜圖中拉開距離。

 

　　對于樣品污染沉積，先用40～50度的純水，低速正向沖洗柱子待柱壓逐漸下降后，相應(yīng)的提高流速沖洗柱壓大幅度下降后，用常溫純水沖洗，之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘，對于第2種情況，由樣品的沉積引起污染的C18柱，和純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇＋異丙醇（4＋6）沖洗柱子（沖洗時間的長短由樣品的污染情況而定），在用換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，然后甲醇沖洗，正向沖洗柱子30分鐘以上。